Колко струва трансформирането на лигатура?

2024 Автор: Miles Stephen | [email protected]. Последно модифициран: 2023-12-15 23:33

Трансформация . Добавете между 1-5 µl от лигиране смес до компетентни клетки за трансформация . Разширено лигиране с PEG причинява отпадане трансформация ефективност (Бързо Лигиране Комплект). Електропорацията се препоръчва за големи конструкции (>10 000 bp).

Оттук нататък колко продукт за лигиране ми е необходим за трансформация?

Трансформация . Добавете между 1-5 µl от лигиране смес до компетентни клетки за трансформация . Разширено лигиране с PEG причинява отпадане трансформация ефективност (Бързо Лигиране Комплект). Електропорацията се препоръчва за големи конструкции (>10 000 bp).

Впоследствие възниква въпросът какво е лигиране и трансформация? В типичен експеримент за клониране изследователите първо вмъкват парче ДНК, като ген, в кръгло парче ДНК, наречено плазмид. Тази стъпка използва рестрикционни ензими и ДНК лигаза и се нарича а лигиране . След а лигиране , следващата стъпка е прехвърлянето на ДНК в бактерии в процес, наречен трансформация.

Впоследствие може да се запита и колко ДНК е необходимо за лигиране?

Общата концентрация на вектор + вмъкване трябва да бъде между 1-10 Μg/ml за ефективност лигиране . Вектор: Препоръчват се моларни съотношения между 1:1 и 1:10 (типично е 1:3). Ако не сте сигурни в своя ДНК концентрации, извършват множество лигации с различни съотношения.

Колко дълго можете да съхранявате реакция на лигиране?

Лигациите могат да се направи при стайна температура или по-хладно (мисля 12-16°C) за една нощ или дори за няколко дни, ако ти наистина съм зает. Можеш също съхранява лигиране в хладилника и го извадете по-късно, за да продължи лигирането при стайна температура за като дълго както е необходимо.