Как се изчислява концентрацията на ДНК с помощта на спектрофотометър?
Как се изчислява концентрацията на ДНК с помощта на спектрофотометър?

Видео: Как се изчислява концентрацията на ДНК с помощта на спектрофотометър?

Видео: Как се изчислява концентрацията на ДНК с помощта на спектрофотометър?
Видео: Gen5: Complete Tutorial 2024, Ноември
Anonim

Концентрация на ДНК е оценено от измерване на абсорбцията при 260 nm, регулиране на A260 измерване на мътност ( измерено от абсорбция при 320 nm), умножаване от факторът на разреждане и използвайки връзката, която А260 от 1.0 = 50 ug/ml чиста dsDNA.

Хората също питат как намирате концентрацията и чистотата на ДНК?

Да се оцени Чистота на ДНК , измерване на абсорбцията от 230nm до 320nm, за да откриете други възможни замърсители. Най-често изчисление на чистотата е съотношението на абсорбцията при 260 nm, разделено на показанието при 280 nm. Добро качество ДНК ще има А260280 съотношение 1,7–2,0.

По същия начин какво е добра концентрация на ДНК? А добре качество ДНК пробата трябва да има A260280 съотношение 1,7-2,0 и A260230 съотношение по-голямо от 1,5, но тъй като чувствителността на различните техники към тези замърсители варира, тези стойности трябва да се приемат само като ръководство за чистотата на вашата проба.

По отношение на това, как NanoDrop изчислява концентрацията на ДНК?

Вие умножавате стойността на абсорбцията при 260 nm по фиксиран коефициент (това е 50 за ДНК ) и получавате Концентрация на ДНК . Voilá. (Добре, технически това е A260 на проба с дебелина 10 мм, която е умножена по 50; NanoDrop изразява A260, сякаш пробата е с дебелина 10 mm, като в стандартна кювета).

Защо трябваше да използваме спектрофотометър, за да определим количествено нашата ДНК?

А спектрофотометър е може да определи средните концентрации на нуклеиновите киселини ДНК или РНК, присъстващи в смес, както и тяхната чистота. Използвайки законът на Биър-Ламбърт го е възможно да се свърже количеството погълната светлина с концентрацията на поглъщащата молекула.

Препоръчано: