Каква е целта на пречистването на PCR продукта?
Каква е целта на пречистването на PCR продукта?

Видео: Каква е целта на пречистването на PCR продукта?

Видео: Каква е целта на пречистването на PCR продукта?
Видео: Post COVID-19 Autonomic Dysfunction 2024, Ноември
Anonim

Пречистване на ДНК от а PCR реакцията обикновено е необходима за употреба надолу по веригата и улеснява отстраняването на ензими, нуклеотиди, праймери и буферни компоненти. Традиционно това се постига с помощта на методи за органична екстракция, като екстракция с фенол хлороформ, последвано от утаяване с етанол.

Също така въпросът е защо е необходимо да се пречистват PCR продуктите?

Ти трябва да пречистване на PCR продукти да се отървете от неизползваните праймери, нуклеотиди и ензими, за да оптимизирате успеха на лигирането, което ще поддържа и секвенира продукт на PCR . Да се пречиствам на PCR продукти , се използва хроматография с изключване на размера.

Освен това, какво трябва да направя след PCR? За да увеличите максимално възстановяването, изплакнете ретентата чаша два пъти с 10 до 20 µL TE или вода. Финалът PCR реакцията може да съдържа до микрограм амплифицирана ДНК, която може да се използва за различни приложения в молекулярната биология. Тези приложения могат да бъдат повече или по-малко чувствителни към остатъчните компоненти на PCR реакционна смес.

Човек може също да попита, как почиствате PCR продукти?

Класическите методи, използвани за чисти нагоре PCR продукти преди секвенирането включват гел електрофореза, утаяване с етанол и колонна хроматография. Макар и доста ефективни, тези методи могат бързо да станат тромави при паралелна обработка на множество проби и да показват различна степен на загуба на проба.

Защо трябва да се почиства ДНК?

ние чисти нагоре ДНК от водни разтвори за отстраняване на буферни соли, ензими или други вещества, които биха могли да повлияят на приложенията надолу по веригата. Примерите включват PCR реакция чисти нагоре, чисти нагоре след рестрикционни усвоявания и чисти до геномен или плазмид ДНК замърсени с клетъчни протеини/остатъци.

Препоръчано: